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动物组织样本的前处理

发布时间: 2022-11-18  点击次数: 89次

一、匀浆介质的制备:

一般采用pH 7.40.01mol/L Tris-HCl1mmol/L EDTA-2Na0.01mol/L蔗糖,0.8%氯化钠溶液或直接用0.86%的生理盐水作为匀浆介质。

二、组织匀浆的制备

1、取组织块(0.1g~0.2g)最少可到25mg在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。

2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(pH7.4, 0.01mol/L Tris-HCl,1mmol/L EDTA-2Na ,0.01mol/L蔗糖,0.8%的氯化钠溶液)或者0.86%的生理盐水于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。

3、匀浆的方式有多种:手工匀浆,机器匀浆,超声粉碎。

① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成10%的匀浆液。

② 机器匀浆:用组织捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行),皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。

③ 超声粉碎:用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用400安培,5秒/次,间隙10秒反复3~5次。

        镜检观察:取少量组织匀浆作涂片(直接涂片、染色均可以),显微镜下观察细胞是否破碎,若没有则可延长匀浆时间。

4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机2500转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.

、样本保存:

        动物组织样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间如不fan复冻融,-20℃以下可保存三个月,-70℃以下可保存六个月。

        制备好的匀浆液建议不要冻存,最好当天进行测定,如放置时间过长相关酶活会有所下降,部分指标4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,总蛋白测定可存5~7天等)


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